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人瘧疾ELISA試劑盒說明書
更新時(shí)間:2015-08-28 點(diǎn)擊量:753

人瘧疾酶聯(lián)免疫分析(ELISA)

試劑盒使用說明書

本試劑僅供研究使用

目的:本試劑盒用于測(cè)定人血清,血漿及相關(guān)

液體樣本中瘧疾。

實(shí)驗(yàn)原理:

本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫法(ELISA)測(cè)定標(biāo)本中人瘧疾。用純化的瘧疾抗體包

被微孔板,制成固相抗體,可與樣品中瘧疾相結(jié)合,經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的抗體和其他成分后

再與  HRP標(biāo)記的瘧疾抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過*洗滌后加底物

TMB顯色。TMB在    HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。用

酶標(biāo)儀在 450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD值),與   CUTOFF值相比較,從而判定標(biāo)本中瘧疾

的存在與否。

操作步驟:

1.編號(hào):將樣品對(duì)應(yīng)微孔按序編號(hào),每板應(yīng)設(shè)陰性對(duì)照 2孔、陽性對(duì)照  2孔、空白對(duì)照   1

孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)

2.加樣:分別在陰、陽性對(duì)照孔中加入陰性對(duì)照、陽性對(duì)照   50μl。然后在待測(cè)樣品孔先

加樣品稀釋液  40μl,然后再加待測(cè)樣品  10μl。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不

觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻,

3.溫育:用封板膜封板后置 37℃溫育30分鐘。

4.配液:將 3048T的  20倍)倍濃縮洗滌液加蒸餾水至  600ml后備用

5.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置 30秒后棄去,如此

重復(fù) 5次,拍干。

6.加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑 50μl,空白孔除外。

7.溫育:操作同 3

8.洗滌:操作同 5

9.顯色:每孔先加入顯色劑 A 50μl,再加入顯色劑 B 50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色

15分鐘

10.終止:每孔加終止液    50μl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。

11.測(cè)定:以空白空調(diào)零,450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度(OD 值)。測(cè)定應(yīng)在加終止

液后 15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。

結(jié)果判定:

試驗(yàn)有效性:陽性對(duì)照孔平均值1.00;陰性對(duì)照平均值0.10

臨界值(CUT OFF)計(jì)算:臨界值=陰性對(duì)照孔平均值+0.15

陰性判定:樣品 OD<臨界值(CUT    OFF)者為人瘧疾陰性

陽性判定:樣品 OD臨界值(CUT    OFF)者為人瘧疾陽性

注意事項(xiàng)

1.操作嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行,本試劑不同批號(hào)組分不得混用。

2.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡 15-30分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開封后如未

用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。

3.濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出,稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,洗滌時(shí)不影響結(jié)果。

4.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

5.底物請(qǐng)避光保存。

6.試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn),使用雙波長(zhǎng)檢測(cè)時(shí),參考波長(zhǎng)為  630nm

7.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。終止液為 2M的硫酸,使用時(shí)必須

注意安全。

保存條件及有效期

1.試劑盒保存:;2-8℃。

2.有效期:6個(gè)月


滬公網(wǎng)安備 31011802001677號(hào)

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